密度梯度离心法纯化细胞外囊泡

实验目的

利用细胞外囊泡的密度特性，将细胞外囊泡与其他细胞成分（如脂质体、蛋白质、大分子等）分开，纯化得到高纯度的囊泡

实验仪器

密度梯度离心仪

实验材料

细胞外囊泡样品、Tris溶液、蔗糖、OptiPrep^TM水性碘克沙醇

实验方法

1. 使用10 mMTris溶液（含0.25 M蔗糖）将60% OptiPrep^TM水性碘克沙醇稀释至，5%，10%，20%，40%，并依次加入超速离心管中；

2. 将超速离心后得到的EVs样品缓慢加入到碘克沙醇溶液顶部；

3. 100,000 × g，4 ℃，使用套筒式转子（推荐SW 41 Ti，14 ml）离心18 h；

4. 从离心管顶部依次向下取等体积12份梯度样品，每份体积1 ml；

5. 将12份样品再次超速离心，4 ℃，100,000 × g，2 h；

6. 弃上清，PBS重悬沉淀。