1. 超速离心法简介

超速离心法是基于粒径不同的颗粒，其离心沉降速度也会有显著差别的原理，通过较小的离心力和较短的时间将粒径比EV大的颗粒先沉降下来，而粒径在100 nm左右的EV仍留存在上清中，再用更大的离心力与更长的时间将EV沉淀富集下来的方法。超速离心法是目前应用最广泛的EV分离方法，被视为EV分离的“金标准”，具有试剂成本低，污染风险低和样本处理量大等优点，然而该方法也存在仪器成本较高、操作技术要求较高、实验时间长，EV完整性和生物活性损伤等缺点。

目前市面上常用的Beckman超速离心机有Optima® XE-100（图1）和Optima^TM MAX-XP（图2）。实验时可根据样品体积及实验目的选择合适的离心机和转子，一般来说离心体积越小，离心效率越高。

图1 Optima^® XE-100超速离心机及其操作界面

图2 Optima^TM MAX-XP超速离心机及其操作界面

2. 超速离心法具体操作步骤：见视频。

3. EV沉淀重悬方法：见视频。

4. 离心时间

文献报道EV的超速离心时间大多为70 min，有研究表明：时间也会影响到囊泡的产量，该研究分别在70 min，4 h，11 h，37 h对离心得到的沉淀分析发现：随着时间延长，沉淀中RNA与蛋白质的含量逐步增加（如图3)。当然延长离心时间势必会带入其他小分子或其他杂质。

图3 适当延长离心时间增加RNA和蛋白质产量

注：引自Journal of Extracellular, 2014, 3: 23111

5. EV的分装与存储

推荐根据NTA或BCA的结果进行多管分装，-80 ℃长期保存，应避免反复冻融。

内容来源于《细胞外囊泡基础研究与临床应用》（陈刚主编），ISBN 978-7-03-076715-8，北京：科学出版社，2024年3月。